可用作ELISA试剂盒测定的标本十分广泛,体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份.有些标本可直接进行测定（如血清、尿液）,有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）.大部分ELISA检测均以血清为标本.血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清.制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得.除特殊情况外,在医学检验中均以血清作为检测标本.在ELISA中血浆和血清可同等应用.
血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色.
血清标本宜在新鲜时检测.如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应.如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深.
一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存.冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡.混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测.反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存.保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂
按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂.ELISA中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的.自配的缓冲液应用pH计测量较正.从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用.试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存.
在ELISA试剂盒中一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物.加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡.
加标本一般用微量加样器,按规定的量加入板孔中.每次加标本应更换吸嘴,以发生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加样.有此测定（如间接法ELISA）需用稀的血清,可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样.也可在板孔中加入稀释液,再在其加入血清标本,然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和.加酶结合物应用液和底物用液时可用定量多道加液器,使加液过程迅速完成.